血清使用及保存常见问题



血清使用及保存常见问题



血清是细胞培养中最重要的元素之一。因此,我们特别整理了一些实验室里常会遇到的问题,供大家参考: 


问题一
保存血清最好的方法是什么?

我们建议血清应保存在-5℃至-20℃。然而,若存放于4℃时,请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶,建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。


问题二

如何解冻血清才不会使产品质量受损?

我们建议您将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。


问题三

血清解冻后发现有絮状沉淀物出现,该如何处理?

血清中沉淀物的出现有许多种原因,但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成,而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后,也会存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物,并不影响血清本身的质量。

若您欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞您的过滤膜。


问题四

为什么要热灭活血清?

加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究,培养ES细胞,昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。


问题五

有必要做热灭活吗?

实验显示,经过正确处理的热灭活血清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。

因此我们建议您,若非必须,您可以不需要做热处理这一步。如此一来,不但节省您宝贵的时间,更确保血清的质量!


问题六

为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀?

胎牛血清没有预老化,储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响血清的质量。推荐在-20℃储存胎牛血清,避免反复冻融。


问题七

如何避免沉淀物的产生?

我们建议您在使用血清的时候,注意下列的操作:

1)解冻血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃),实验显示非常容易产生沉淀物。

2)解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。

3)请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量。

4)血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。

5)若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。

问题八

Qualified和 Certified 胎牛血清有什么差别?

Certified胎牛血清包括了Qualified胎牛血清执行的所有的标准检验程序,除了这些标准检测,Certified胎牛血清还有一些附加的检测:


最终内毒素含量的检测

噬菌体检验

生物化学检测 

激素的检测

血红蛋白检测

Sf9细胞生长促进及方法学检测


问题九

如何评估ES细胞合格的胎牛血清?

使用D3 ES细胞。这是一个对于胎牛血清中生长促进、生长抑制和分化因子非常敏感的细胞系。


相关生长效率分析:

当ES细胞以非常低的密度传入包含10%胎牛血清的生长培养基中,检测启动和支持ES细胞克隆的能力。


细胞毒分析:

当以非常低的密度传入包含30%胎牛血清的生长培养基中,检测ES细胞和feeder细胞的生长能力。


相关形态学和分化分析:

检测胎牛血清支持未分化ES细胞克隆的能力。通过碱性磷酸酶活性评估分化程度。未分化的ES细胞小颜色深红粉红,分化的细胞较大,丰满,颜色较浅。

所有的分析在没有ESGRO的情况下进行,培养基中出现ESGRO会掩盖由胎牛血清所导致的问题。(ESGRO或LIF经常用来保持ES细胞处于未分化状态。)

培养发现大约8批血清中有1批可以用来培养ES细胞。



创建时间:2022-12-13 15:48
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