细胞凋亡、周期常见问题
细胞凋亡试剂盒常见问题
我的样本有GFP自发荧光，应该选择哪一种配色？
如果流式仪没有561nm激发光，建议避开PE通道；
FITC和PE调补偿很难，应该选择哪一种配色？
AnnexinV-AlexaFluor647/PI或 AnnexinV-AlexaFluor488/PI；
除凋亡外，需要同时检测其他marker，是否可以？
膜表面抗体可以，胞内不可以；
除凋亡外，需要同时检测其他marker，
没有合适的荧光怎么办？
可以选择合适荧光的Annexin V抗体；
Annexin V是该依赖性的磷脂结合蛋白，而EDTA是钙离子螯合剂；胰酶+EDTA消化能力过强，会造成细胞死亡，影响结果的真实性；
应使用Accutase进行细胞消化；
FSC/SSC是否需要圈门？
可以只去除细胞碎片；
检测不到凋亡率如何判断是操作问题
还是样本确实没发生亡？
推荐可以设置阳性对照：喜树碱、双氧水或55℃水浴30s-1min（时间可能需要调整）；
为什么PI阳性率很高？
贴壁细胞在消化、吹打和离心的时候可能会存在机械损伤，尤其是较难消化的细胞；
培养的细胞细胞上清是否需要保留？
需要。
buffer可以用PBS吗？
必须要用试剂盒配套binding buffer。
细胞周期试剂盒常见问题
如何排除黏连体？
①在流式上样前用滤器过滤掉粘连细胞；
②流式分析时尽量用低速；
③在流式分析时A/W或A-H去除粘连细胞；
细胞周期数据如何分析？
可使用modifit软件，使用方法参考说明书；
固定后细胞数太少怎么办？
可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力；
为什么没有S期？
一般是因为固定不完全，①使用-20℃冷冻过夜的冰乙醇；②乙醇与细胞混合需逐滴加入并实时混匀；③固定12-24小时效果更佳；
凋亡和周期的PI是否可以混用？
不可以。
创建时间：2022-12-13 15:49
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