22色流式方案 | 小鼠固有淋巴细胞的多参数免疫分型和功能检测
该 25 参数、22 色全光谱流式细胞术panel经过设计和优化，可全面计数和表征小鼠组织中的ILC亚群的功能。可以区分ILCP、ILC1、ILC2、NCR+ ILC3、NCR-ILC3、CCR6+LTi-like ILC3和成熟NK细胞群。通过加入亚群特异性细胞因子标记物和增殖标记物，可以进一步表征ILC和NK细胞对刺激后的功能特征。该panel的开发和优化是在从成年BALB/c小鼠肺和小肠固有层中新鲜分离的细胞上进行的，并使用PMA、离子霉素和pro-ILC激活细胞因子进行体外刺激。
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概述
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Cytek® Aurora流式细胞仪信息
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Panel
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圈门策略
➤ FMO对照如下:
➤ 结果图如下：
1）首先排除碎片、排除粘连体，圈选CD45+的活细胞。
2）接着，圈选Lin-IL-7Rα+的ILC群，并在其中分出PLZF+的ILCP。
3）在小鼠肺组织中，对ILC中非ILCP部分进行分析（即成熟的ILC），分出ILC和ILC2。其中T-bet+、RORγt-、CD49b-、ST2-、NKp46+、IL18Rα+的ILC1根据CD49a和TRAIL再分出两个亚群；Tbet-、RORγt-、CD49b-、GATA3+的ILC2，根据ST2和KLRG1分出三个亚群；RORγt+的ILC3根据CCR6和NKp46分出三个亚群。
4）ILC的功能，可通过PMA+离子霉素+BFA+IL12、IL18共同刺激5小时，验证其效应因子表达。
5）而NK细胞，则在前面的Lin+群体中分出T-bet+NKp46+的群体，并根据CD49a、CD49b分出trNK和cNK。
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